Word met die gemeenskap van Schizophyllum: skep 'n steriele kultuur uit sampioene: 3 stappe (met foto's)

2024 Outeur: John Day | [email protected]. Laas verander: 2024-01-30 07:27

Hierdie instruksies fokus daarop om te verduidelik hoe u 'n steriele kultuur van die sampioen Schizophyllum Commune (gewone naam Split Gill -sampioen) kan skep op 'n petriskottel met gevindde sampioene. Daar is gevind dat Schizophyllum Commune meer as 28 000 geslagte het, op alle kontinente behalwe Antarktika aangetref word, en dit het die vermoë (soos ander "wit en bruinvrot swamme") om besmetting deur hormoonontwrigting te verswak (plastiek, hormoon wat industriële petrochemie naboots, soos die kunsmis Atrazine, die weekmaker Bisphenol-A, of die sintetiese hormoon Diethylstilbestrol).

Ek gaan oor die identifiseringstegnieke van wilde sampioene, hoe om 'n petri -gereg met voedingstowwe te maak en hoe u sampioene wat u gevind het, kan gebruik om 'n steriele geïsoleerde kultuur in u petri -gereg te kweek. Ander instruksies in hierdie reeks handel oor tegnieke soos genetiese identifikasie van sampioene, eenvoudige ensiematiese toetse om die sampioen se vermoë om plastiek af te breek en hormoon wat besoedeling naboots, te toets en hoe om kaas met S. Commune te maak.

Hierdie projek kom uit die samewerkingswerk van Mary Maggic, Paula Pin, en myself tydens 'n verblyf in HANGAR in Barcelona, Spanje, herfs September 2018. Lees meer oor ~ ~ of slaan al die Bla Bla oor en gaan direk na Step 1 vir die tutoriaal:)

Prente is afkomstig van die Schizophyllum Commune Fanzine ~ lêers kan hier gratis afgelaai word

Tydens die verblyfreg was ons drie hoofdoelwitte:

1 ~ Ondersoek en verteer die wetenskaplike literatuur oor Schizophyllum Commune en dit is verskillende interaksies met hormone en endokriene ontwrigtende petrochemiese besoedelingstowwe. S. Commune is een van die vele "wit en bruinvrot" swamme met die vermoë om besoedeling deur hormonale en endokriene ontwrigtings af te breek. Hierdie swamme voed van bome deur "lignocellulosiese" ensieme uit hul netwerkliggame of "mycelia" uit te skei, en die ensieme kan die sellulose en lignien wat bome gemaak word, afbreek. As gevolg van strukturele ooreenkomste tussen sellulose, lignien en EDS / Hormone soos Atrazine, BPA, Estradiol, Diethylstilbestrol en Nonylphenols, kan die "lignocellulosiese" ensieme wat deur die swamme afgeskei word, ook 'n wye verskeidenheid toksiese middels afbreek. Daarbenewens produseer S. Commune immuunstimulerende polisakkariede wat nuttig is as kankervoorkomings en behandelings (Goedgekeur in Japan vir die behandeling van servikale kankers), wat die fito -estrogeen eienskappe van sekere plante kan versterk deur middel van fermentasie, kan gebruik word in plaas van stremsel en lactobacilius in kaasprosesse en produseer trombienoplossende ensieme (nuttig vir die behandeling van trombose). Vreemd genoeg word dieselfde "beta-glukane" wat met kookwater onttrek kan word as kankerbehandelings en immuunstimulante, ook deur die petroleumbedryf gebruik om olie-opbrengste te verbeter, wat S. Commune in 'n bizar-terugvoerlus bind aan die produksie van hormoonontwrigende petrochemikalieë kan dit afbreek en herstel.

2 ~ Ontwikkel DIY- en DIWO -protokolle (doen dit saam met ander) om hierdie ontvangste te vereenvoudig om saam met EDC's en swamme te werk om gekodifiseerde wetenskaplike kennis te vertaal in 'n meer toeganklike taal. Gebruik hierdie gawes vir opvoeding, vir bevraagtekening, vir weerstand teen molekulêre kolonisasies, en om nuwe verhale te skep oor multispesies en ons kollektiewe mutagenese.

3 ~ Daag die dominante cisheteronormatiewe, queerphobiese diskoers rondom chemies wat hormoonontwrigbaar is (EDC's) uit. Om die beurs van Malin Ah-King en Eva Hayward oor die kwessies aan te haal: "Baie nuusberigte rapporteer hierdie skrikwekkende endokriene verhale uit ons agterplase. In 'n poging om hierdie aangeleenthede op die voorgrond te plaas-soos ons in die volgende media sal beskryf, het 'n Frankenstein-metamorfose aan die brand gesteek wat seks en seksualiteit bedreig. Pleks van die vele ander gesondheidsrisiko's wat verband hou met toksiese blootstelling, is die mees opspraakwekkende en polemiese kwessies wat debatteer en krities reageer. Dit laat vrae ontstaan: Waarom staan seks meer sentraal as kanker, outo-immuun siekte, en selfs die dood? Watter kulturele senuwees (waarvan baie geglobaliseer is) word veroorsaak? En hoe heroriënteer ons die debat weg van essensialisme, seksisme en heteronormatiwiteit vir ons wat feministies is? " (Giftige geslagte).

Schizophyllum Commune is 'n unieke 'witvrot -swam' omdat daar meer as 28 000 genetiese geslagte is. Hierdie aanpassing, baie teoretiseer, het die ongelooflike genetiese diversiteit van hierdie spesie moontlik gemaak wat op elke kontinent regoor die wêreld bestaan, behalwe Antarktika. Ons wou die pragtige seksuele veelvoud van hierdie organisme vier as 'n voorbeeld van die gierigheid van biologie. Die dominante diskoers rondom EDC's in die media, en selfs van omgewingsaktiviste fokus sterk op onwetenskaplike vertellings, dat hierdie molekules sekere seksualiteite of geslagte veroorsaak wat ons samelewing patologiseer, nie-normatief noem, en dikwels probeer uitskakel of vermy. Die seks-paniekbevange, eienaardige fobiese fokus van openbare oproer oor EDC se wetenskaplik onrealistiese (hormoon en hormoonontwrigters maak mense nie vreemd of trans nie), maar dit ignoreer al die verwoestende werklike gevolge wat ons kan koppel aan EDC's: vetsug, skildklierafwykings, sekere kankers, onder andere gesondheidsrisiko's.

Stap 1: Vind Schizophyllum Commune wat in u gemeenskap woon

Steriele kulture van die laboratoriumgraad van die Schizophyllum Commune kan vir ongeveer $ 350 gekoop word by 'n mikrobiologiese kultuurbank, soos ATCC … daarom het ons gratis gekies vir wilde sampioene:)

Ek het dit maklik gehad, want ek het gelees oor Schizophyllum Commune en het net opgemerk dat dit eendag op 'n boom voor my woonstel groei. As u nie so gelukkig is om per ongeluk by S. Commune in u omgewing af te kom nie, wil u na 'n beboste gebied gaan soek na 'bracket' sampioene wat groei op sieklike hardehoutbome (bome wat lyk asof hulle nie doen nie) te goed) of omgevalde bome. S. Commune is een van die algemeenste bestaande swamme regoor die wêreld en kan basies oral gevind word waarop hardehout kan groei.

Mushroomobserver.org bied 'n uitstekende gedetailleerde beskrywing van waar en wanneer u waarskynlik S. Commune sal vind, asook hoe u dit kan identifiseer en hoe u 'gelyk kan lyk' wat kan lei tot verkeerde identifikasie:

"IDENTIFIKASIE: Schizophyllum-gemeente kan maklik herken word aan sy gesplete kieue, digte hare en waaiervormige dop. Dop is 1-4,5 cm breed en gewoonlik 'n dop- of waaiervorm met 'n grys tot witterige oppervlak. Basidiospore is 5-7,5 × 2 -3 mikrometer 'n Soortgelyke sampioen bekend as die "Crimped Gill" Plicaturopsis crispa is nie so wyd versprei nie.

HABITAT: Schizophyllum commune groei op hardehout met behulp van ensieme om lignien af te breek en veroorsaak 'witvrot'. Dit word dus in die meeste houtagtige gebiede aangetref. Dit kan die hele jaar gevind word vanweë sy vermoë om uit te droog, in beter toestande te hidreer en dan voort te gaan om te sporuleer.

Hierdie swam kan parasities wees op bome met 'n klein deursnee wat onder druk is deur ander faktore, soos droogte.

KYK ALS: Plicaturopsis crispa of die "Crimped Gill" is soortgelyk aan die Split Gill. Dit het ook 'n dop/waaiervormige vrugtige liggaam. Die pet is egter rooibruin of geelbruin, en die onderkant is baie kenmerkend. Dit het krimpvate soos kieue wat baie anders is as die gesplete kieue van die Schizophyllum -gemeente. Die Crimped Gill is minder algemeen, maar kenmerkend wanneer dit gevind word."

Stap 2: Maak voedingsplate vir S. Commune om op te groei

Om 'n kultuur van die S. -gemeenskap te isoleer, benodig u 'n paar petriskosse gevul met kos vir die sampioen. Moutekstrak Agar is 'n eenvoudige voedsel vir S. Commune, of 'voedingsmedia' wat gemaak kan word met maklik toeganklike bestanddele. Dit is ook 'n goeie voedselbron om te gebruik wanneer u ensiematiese toetseksperimente met S. Commune en ander wit- of bruinvrotswamme doen ~ ~ hierdie proses sal in 'n ander instruksie behandel word.

SIDE OPMERKING: As u probleme ondervind met die vind van S. Commune, is daar baie ander swamme in dieselfde familie wat met dieselfde prosesse verbou kan word en net so goed is, indien nie beter nie, om verontreinigende stowwe wat hormoon versteur, te verneder. Turkey Tail (Trametes Versicolor) is gevind in baie studies wat na honderde wit- en bruinvrot -swamme beskou het as die hoogste produsente van die "lignocellulosiese" ensieme wat petrochemiese besoedeling afbreek. Oestersampioene is ook baie goed hiermee.

Ek doen my mikrobiologiese werk in 'n gemeenskapsbiologielaboratorium genaamd BUGSS (Baltimore Underground Science Space) waar ek toegang het tot glasware, digitale weegskale, gegradueerde silinders, 'n outoklaaf (vir hitte- en druksterilisasie van die media), ens. het die afgelope dekade oor die hele wêreld ontstaan, so u kan hierdie lys nagaan om te sien of daar een naby u is. As u nie 'n wonderlike gemeenskapslaboratorium in u omgewing het nie, moet u in basiese toerusting belê vir hierdie proses, soos:

1 ~ 'n Digitale skaal om u bestanddele presies te meet

2 ~ 'n Drukkoker om u media met hitte en stoom te steriliseer

3 ~ Petri-skottelgoed, kan redelik goedkoop aanlyn gekoop word, herbruikbare glas of weggooibare plastiek werk, maar herbruikbaar is altyd beter:)

4 ~ 'n Paar glasware om u bestanddele in te meng, te steriliseer en in te bêre.

As u nie in die toerusting wil belê nie, kan u voorafgegoteerde moutextract-agarplate vind om op webwerwe soos Amazon te koop ~ dit sal op die lange duur net duurder wees as u van plan is om voort te gaan met mikrobiologiese werk.

Daar is al baie goeie gidse en youtube -video's oor hoe u u eie petri -geregte met voedingstowwe tuis kan maak. Dus, eerder as om in detail hieroor in te gaan, skakel ek net na 'n paartjie - en ek gee die resep vir 2% moutekstrak -agar, wat die voedingsmedium is wat u sal gebruik.

Freshcap Musrooms: Gids oor hoe om agarborde te maak vir die kweek van sampioene tuis

Mykoweb: Begin met die verbouing van sampioene

Mout uittreksel Agar tegniese gegewensblad

2% moutekstrak -agar (MEA) ~ ~ Resep vir 1 liter:

20 g moutekstrak (gewone biervoorraad, kan aanlyn gekoop word)

15 g Agar (stollingsmiddel - dit word gereeld gebruik om mee te kook, sodat dit aanlyn of in sommige kruidenierswinkels gekoop kan word)

1 liter H20 (ek gebruik gewoonlik omgekeerde osmose -water wat by die meeste kruidenierswinkels in literbakke gekoop kan word)

Hierdie resep kan maklik aangepas word as u kleiner hoeveelhede wil maak. Ek maak byvoorbeeld slegs 250 ml op 'n slag, dus gebruik ek slegs 5 gram moutekstrak, 3,75 gram Agar en 250 ml water.

Stap 3: Skep u petrischaal met swamme in

Die sampioen wat u sien, word die 'vrugte -liggaam' genoem, dit is slegs 'n klein deel van die organisme. Die grootste deel van die liggaam is in die boom (of in die grond) versteek en verteer die hout. Hierdie deel van die sampioen word die miselium genoem. Om kultuur van die wit filamentagtige, tentakulêre, risotiese, myceliale liggaam van Schizophyllum Commune op 'n petriskottel te neem, neem u 'n monster van die stam, steriliseer en plaas dit op u MEA -borde. Mycelium groei uit die gesteriliseerde sampioenstamkernmonster en koloniseer die petriskottel, wat soos 'n wit katoenmat lyk.

Jy benodig:

• Die Malt Extract Agar (MEA) plate wat u in die vorige stap voorberei het
• 70% isopropylalkohol (vryfalkohol) en 'n spuitbottel
• Papier handdoeke
• Scalpel, of net 'n skeermes vir vlekvrye staal, sal werk
• metaal pincet
• handskoene
• 'N Vlam - ek gebruik 'n alcohaul -lamp om instrumente te steriliseer, NonDisjunction het 'n uitstekende handleiding oor hoe om een hier te maak.
• Steriele oppervlak om op te sny (ek het net 'n steriele petriskottel hiervoor gebruik)
• Parafilm, 'n paraffienfilm wat gebruik word om petriskottels te verseël - u kan ook net maskeerband gebruik as u dit nie het nie

STERIELE TEGNIEK:

Die belangrikste ding wat u in gedagte wil hou as u steriele tegnieke probeer gebruik, is dat bakterieë en spore voortdurend in die lug val, sodat u u petriskottels soveel as moontlik bedek wil hou. As u die deksels optel om media te giet of in te ent, is dit altyd die beste om die deksel net bokant die skottel te hou, sodat u die binnekant horisontaal kan benader, maar die deksel bo die skottel kan hou om te voorkom dat bakterieë binnedring. Tweedens kan u is 'n reuse konglomeraat van mense, bakterieë, swamme en ander organismes ~ ~ alhoewel u dit nie kan sien nie, omring u u deur 'n digte wolk van mikrobes wat deur u liggaam versprei. In plaas van net op die oppervlak van u vel te sit, strek u mikro-bioom in die lug ~ ~ sooooooo, moenie ooit met u hande oor die petriskottel waai nie, of leun oor die oop skottel om in te kyk. En dra handskoene as jy het hulle;)

Stel u half-steriele werkruimte op

Kies 'n nie-poreuse werkoppervlak sonder afval en rommel. Spuit die gebied af met u 70% isopropylalkoholoplossing en vee dit af met 'n papierhanddoek. Plaas jou vlam in die middel van jou werkarea en steek dit aan. U wil so na as moontlik aan die vlam werk, want dit skep 'n klein steriele veld rondom dit. Plaas u MEA -plate aan die een kant en u sampioenmonster op 'n steriele snyoppervlak aan die ander kant. Ek gebruik gewoonlik 'n steriele petriskottel as my steriele snyoppervlak, sowel as 'n gereedskapstut. Giet 'n bietjie isopropylalkohol in 'n klein glas - jy sal dit gebruik om jou lem en pincet te steriliseer terwyl jy werk.

*¡~ INOCULATE ~!*

Voordat u iets doen, steriliseer u lem en pincet deur dit in die isopropylalk te steek en dit dan 'n rukkie oor die vlam te hou. Na sterilisasie, rus dit op u steriele snyoppervlak as u dit neersit. Hou die sampioenstam stil met 'n pincet en sny 'n stuk van die punt daarvan af. Neem hierdie stuk en sny al die kante sodat u 'n klein blokkie sampioenstamkern kry met al die buitenste oppervlaktes verwyder. Dit help om ontslae te raak van al die ander mikrobes wat op die sampioen leef, sodat dit u kultuur nie besmet nie. Dompel die stamkern dan ongeveer 30 sekondes in die isopropyl, trek uit en laat dit droog word binne die steriele vlamveld (moenie die vlam gebruik om dit te droog nie, dit sal die sampioen doodmaak). Vlam steriliseer jou pincet weer terwyl jy wag totdat die stamkern droog is. Lig dan die deksel van een van u MEA -plate net genoeg om die pincet van die kant af in te skuif, en gebruik die gesteriliseerde pincet om die stamkern in die middel van die bord te plaas. Verseël die bord met parafilm, en in die komende weke moet u sien dat S. Commune -mycelium die plaat koloniseer.

Ek maak gewoonlik verskeie borde wanneer ek met wilde monsters werk, sodat as ek besmetting kry, meer kans is op ten minste een skoon kultuur.